Assassin’s Creed Brotherhood — это тот же стелс-экшен от третьего лица, где помимо множества разнообразных врагов, разработчики удачно протестировали некоторые функции и нововведения для будущих частей. Сиквелл второго Ассасина показывает действия Ордена в Италии с конца 15, начала 16 века. В Риме Эцио Аудиторе да Фиренце продолжает войну с тамплиерами. Цель Дезмонда — погрузиться в собственный код ДНК, найти Эцио, стать им и освободить Италию от тиранического воздействия на жителей клана Борджиа. Например, в игре управление делится на части тела, пока вы не находитесь в бою. Нажав на клавишу, управляющую головой, вы можете подразнить стража, и он начнет вас атаковать. Если вы делаете то же самое с рукой, то можете сразу убить стражника. Однако это зависит от его уровня.